常溫細胞收貨當天處理方式
1.收到常溫細胞后,及時拍照記錄有無漏液瓶身破損現(xiàn)象。
2.鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象拍照記錄不同倍數鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象,方便后續(xù)售后處理。
3.消毒后,更換贈送的完全培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2.3小時。如細胞有多數懸浮細胞需要高心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。
4.觀察細胞密度若超過80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代。請根據實際情況決定),初次傳代推薦比例1:2到:(按實際收貨細
胞密度決定,若不確定可聯(lián)系技術支持)若細胞密度不到80%則可繼續(xù)培養(yǎng),注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基
以收集細胞。
5.由于氣溫運輸等影響造成貼壁細胞漂浮的.請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代,或及時聯(lián)系技術支持進行指導傳代。
6.該細胞對培養(yǎng)基及血清的質量要求較高,其中任何-一個質量不好都會導致后續(xù)培養(yǎng)過程中細胞的分化,特別是傳3、4代以后細胞容易出
現(xiàn)分化,細胞變大貼壁較緊呈典型”攤雞蛋”樣;
7.該細胞在傳代或復蘇后,剛貼壁時會有短小的突觸,但細胞胞體還是呈圓形或近圓形待細胞培養(yǎng)23天后,短小突觸會消失;
8.如果用胰酶消化經驗不足時,極易導致后續(xù)細胞形態(tài)的改變也不容易將細胞消化下來,
9.如果用細胞刮將細胞刮下來容易導致大量細胞死亡和細胞形態(tài)的改變也不容易分散為單細胞;
10該細胞不管在任何密度下腰是更換了新鮮培養(yǎng)基后緊接著進行吹打細胞會很難從培養(yǎng)瓶壁,上脫落。
推薦的傳代方法有以下兩種:
方法一該細胞在細胞密度較大.培養(yǎng)基較黃時,不要去除舊培養(yǎng)基用移液管直接對培養(yǎng)瓶壁上的細胞進行吹打使細胞從壁上脫落。細胞
脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶也可收集培養(yǎng)瓶中的細胞懸液,離心后,棄上清再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞后分瓶,進行
培養(yǎng)。這種方法容易出現(xiàn)的問題是如果操作者經驗不足可能導致部分細胞無法脫落。
方法二細胞密度達到80-90%,需要進行傳代時可在培養(yǎng)瓶中的原培養(yǎng)基中滴加1- 2滴無菌的HEPES緩沖液視培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的體積適
當可以增加HEPES*的用量)作用1-327min,使培養(yǎng)基PH變酸培養(yǎng)基顏色變黃,直接用移液管進行吹打這時細胞會很輕易脫落并成單細
胞。細胞脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶;也可收集培養(yǎng)瓶中的細胞懸液高心后,棄上清,再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞后
分瓶進行培養(yǎng)。
