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細胞的凍存方法:
1.細胞:選對數生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。
2.計數:按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液計數。令細胞密度達5x106/ml,離心去上清吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液按上法-滴滴加入離心管中然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后仔細檢查定要封嚴必要時可浸入藍色液中觀察為安全起見把安剖縫入紗布小
袋中,以防液氮浸入后融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人紗袋一端系以線繩 末端扎有小牌,注明細胞名稱:凍存日期以便日后查找。
細胞復蘇的方法:
1從液氮罐中取出安剖有時因安剖未封嚴浸入了液氮。取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應帶有防護眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36C-370水的搪瓷罐中扣上蓋并不時搖動盡快解凍。
3.剪開紗布口袋取出安剖用70%酒精擦拭消毒后凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液裝入離心管中,再補加10m1培養(yǎng)液吹打使細胞懸
浮。
4.低速離心(500-1000轉分)5分鐘取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5.加入培養(yǎng)液適當稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項:
1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好。培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.產品僅供科研先不開瓶蓋瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數小時(4h左右).穩(wěn)定細胞狀態(tài)切忌在溫箱內靜置過夜。
3.靜置后鏡檢;拍照記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4.貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代:若未超過80%,收集細胞瓶內的培養(yǎng)基留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代瓶蓋可稍微擰松。
5.細胞瓶內的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4C保存?zhèn)溆?可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養(yǎng)基。一半用客戶自備的

培養(yǎng)基,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件,以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。

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